激光共聚焦显微镜是一种在20世纪80年代中期开发并被广泛使用的新技术[1]。它是激光,电子相机和计算机图像处理等现代高科技手段。分子生物学分析仪器已广泛应用于生物学和医学领域,已成为生物医学实验研究不可或缺的工具。
一、激光共聚焦显微镜的缺点
激光共聚焦显微镜使用激光束通过照明针孔形成点光源,以扫描样品中焦平面的每个点。样品上的照射点在探针针孔处成像,并且检测探针针孔后面的光电倍增管(PMT)。或者逐点或逐行接收冷耦合装置(cCCD)以在计算机监视器屏幕上快速形成荧光图像。
照明针孔和检测针孔相对于物镜的焦平面共轭,焦平面上的点同时聚焦在照明针孔和发射针孔上,焦平面外的点不在由此获得的探针针孔共焦图像是样品的光学截面,克服了普通显微镜图像模糊的缺点。
二、激光共聚焦显微镜的光源
传统的光学显微镜使用场源。样品上每个点的图像受到来自相邻点的衍射或散射光的干扰。激光共聚焦显微镜使用激光束照射针孔,以形成样品焦平面中每个点的点源。扫描时,样品上的被照射点在探针针孔处成像,探针针孔后的点状倍增管(PMT)或冷耦合装置(cCCD)逐点或逐行接收,在计算机监视器屏幕上快速接收在其上形成荧光图像。
照明针孔和检测针孔相对于物镜的焦平面共轭,焦平面上的点同时聚焦在照明针孔和发射针孔上,焦平面外的点不在由此获得的探针针孔共焦图像是样品的光学截面,克服了普通显微镜图像模糊的缺点。
激光共聚焦显微镜是一套以激光为光源的观察,分析和输出系统,在传统光学显微镜的基础上采用共轭聚焦原理和装置,并利用计算机对观察进行数字图像处理,宾语。使用紫外或可见光激发荧光探针,将光学成像的分辨率提高30%至40%。
从而获得细胞或组织内的精细结构的荧光图像,并观察亚细胞水平的生理信号和细胞形态的变化。在形态学,分子生物学,神经科学,药理学,遗传学等领域的新一代研究工具。
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