激光扫描共聚焦显微镜是在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激发荧光探针。利用计算机进行图象处理，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图象，以及在亚细胞水平上观察诸如Ca2+、pH值、膜电位等生理信号及细胞形态的变化。

一、激光共焦显微镜的优点

⒈激光共聚焦显微镜使用激光作为光源，在标记相应的荧光探针后，逐点扫描样品，逐层获得二维光学截面图像，具有“细胞CT”的功能。并可由计算机三维重建软件支持。获取三维图像并以任意角度旋转以观察细胞，组织三维形状和空间关系。

⒉可以无损伤地观察活细胞和组织，动态测量活细胞的生理信息，如细胞内Ca离子浓度和pH值。

⒊可对细胞膜流动性，细胞间通讯，细胞融合，细胞骨架弹性测量等，可作为“光刀”完成细胞内“手术”。该技术能够进行原位动态定量观察和活细胞和组织的测量。

与传统的光学显微镜相比，激光共聚焦显微镜具有更高的分辨率，可以在形成清晰的三维图像的同时观察到多个荧光。

二、激光共聚焦显微镜的工作原理

传统的光学显微镜使用的是场光源。样品上每个点的图像受到来自相邻点的衍射或散射光的干扰。激光共聚焦显微镜使用激光束照射针孔，以形成样品焦平面中每个点的点源。扫描时，样品上的被照射点在探针针孔处成像，探针针孔后的点状倍增管（PMT）或冷耦合装置（cCCD）逐点或逐行接收，在计算机监视器屏幕上快速接收在其上形成荧光图像。

照明针孔和检测针孔相对于物镜的焦平面共轭，焦平面上的点同时聚焦在照明针孔和发射针孔上，焦平面外的点不在由此获得的探针针孔共焦图像是样品的光学截面，克服了普通显微镜图像模糊的缺点。

激光共聚焦显微镜是一套以激光为光源的观察，分析和输出系统，在传统光学显微镜的基础上采用共轭聚焦原理和装置，并利用计算机对观察进行数字图像处理，使紫外或可见光激发荧光探针，将光学成像的分辨率提高30％至40％。

从而获得细胞或组织内的精细结构的荧光图像，并观察亚细胞水平的生理信号和细胞形态的变化。在形态学，分子生物学，神经科学，药理学，遗传学等领域的新一代研究工具。

激光扫描共聚焦显微镜作为一种新的实验工具和强大的研究工具，为解决以往研究工作中无法解决的一些技术问题创造了条件，因此将得到更广泛的应用。随着新软件的不断发展以及各学科的不断发展和相互渗透，相信它将具有更广阔的发展前景。
 

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