光学显微镜是一种光学仪器,利用光学原理放大并成像人眼无法分辨的细小物体,以供人们提取精细的结构信息。激光共聚焦显微镜(CLSM)是一种现代生物医学图像仪器。
它基于荧光显微镜的成像,并配备有激光扫描设备,该设备使用紫外线或可见光激发荧光探针。图像处理由计算机执行,以获取细胞或组织内部精细结构的荧光图像,并在亚细胞水平上观察生理信号(例如Ca2 +,pH,膜电位和细胞形态)的变化。
激光共聚焦显微镜能够克服传统光学显微镜的低景深的原因,主要是因为传统光学显微镜使用面光源同时激发样品。当放大倍率增加并且光学系统的景深降低时,会捕获到许多未聚焦的信号,从而导致在整个视场中无法获得清晰的图像。
激光共聚焦显微镜使光源前面的针孔与检测器前面的针孔共轭,因为只能检测到焦平面附近的信号,因此图像的光学分辨率,特别是在样品的深度方向上很远。它远远优于传统的宽视野显微镜。
结合激光源的良好方向性,高亮度和相干性,可以获得更高质量的图像。同时,可以使用激光源来激发与激发波长相对应的荧光成分,从而减少干涉荧光的影响。利用激光单色性可以实现单色光成像。如果滤除常规光源(例如氙气灯,水银灯等,光源的光源带很长),则难以通过常规光学显微镜实现单色光成像。
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